VoltarPCR – Informações para o atendimento de primeiro nível
O que é?
É um ensaio cujo objetivo é detectar os patógenos (exemplo: bactérias, fungos, etc.) da mastite (infecção intramamária) em vacas, por meio da análise de amostras de leite coletadas do tanque e de vacas.
Diferença entre Cultura e PCR
Este ensaio tem o mesmo objetivo da cultura, detectar agentes causadores da mastite.
Contudo são duas ferramentas diferentes para a detecção de patógenos, baseadas em métodos diferentes.
A cultura detecta o patógeno a partir do seu cultivo e crescimento em placas enquanto o PCR detecta o DNA (material genético) dos patógenos-alvo presentes na amostra de leite analisada.
Quais patógenos são pesquisados - TOTAL 15 agentes ?
Mycoplasma spp.
Mycoplasma bovis
Streptococcus agalactiae
Streptococcus uberis
Streptococcus dysgalactiae
Enterococcus spp.
Staphylococcus aureus
Staphylococcus spp.
Escherichia coli
Klebsiella spp.
Serratia marcescens
Prototheca spp.
Levedura
Corynebacterium bovis
Trueperella pyogenes
Quais amostras podem ser analisadas?
- Amostras individuais de vacas, com CCS alta (> 200 mil células/ml, novas e crônicas) ou vacas recém-paridas.
- Amostras de tanque (enviadas por indústrias ou fazendas), para triagem e monitoramento de rebanhos ou lotes;
- Pool de amostras, amostras compostas por amostras individuais (até 5 vacas por pool), para triagem de grupos de vacas.
Como deve ser realizada a coleta e o envio das amostras?
A análise de PCR pode ser realizada nas mesmas amostras enviadas para a análise de contagem de células somáticas (CCS) e composição, seguindo-se as mesmas instruções de coleta e envio dessas amostras.
No caso de fazendas, a coleta é realizada em frascos de tampa vermelha, intervalo máximo de 10 dias entre a coleta e a análise.
No caso de indústrias, a coleta é realizada em frascos de tampa amarela, intervalo máximo de 7 dias entre a coleta e a análise.
O PCR também pode ser realizado em amostras congeladas ou coletadas diretamente do teto (amostras assépticas). Contudo, nesses casos a informação de CCS estará indisponível (amostras congeladas) ou estará subestimada por não representar a ordenha completa da vaca (amostras assépticas). É importante que as amostras enviadas estejam íntegras e conservadas adequadamente, sem sinais de degradação. Por isso, mesmo em amostras com conservante, deve-se evitar mantê-las em locais quentes; e, no caso de amostras congeladas, ciclos de congelamento/descongelamento da amostra.
Como mencionado anteriormente, há ainda a possibilidade de realizar a análise em pool, que é a análise de uma amostra composta pela mistura do leite de amostras individuais (até 5 amostras por pool). Nesse caso, deve-se identificar quais amostras comporão cada pool na ficha de campo, sendo a formação da amostra composta realizada pelos analistas da Clínica do Leite previamente à análise.
Para analisar PCR o frasco de CCS não deveria ser esterilizado?
100% dos frascos utilizados são novos, e todo o frasco ao ser fabricado atinge 150ºC, portanto, na prática, todos são estéreis.
O PCR por sua vez pesquisa agentes causadores da mastite específicos, e o conservante (bronopol ou brononata) tem propriedades bactericidas não permitindo crescimento bacteriano depois da coleta realizada.
É possível analisar amostras de leite de animais em tratamento com antibióticos?
Sim. Contudo, deve-se avaliar a relevância desse resultado clínico: primeiramente, pelo PCR detectar bactérias não viáveis (bactérias mortas); segundo, por existir uma chance maior de um resultado não detectado (ausência de bactérias na amostra de leite).
É possível analisar amostras de vacas com mastite clínica?
Sim. Contudo, existe restrição quanto à análise de CCS quando há a presença de grumos ou sangue na amostra.
É realizado antibiograma?
O PCR detecta os patógenos causadores de mastite por meio da análise da amostra de leite, mas não é verificada a sensibilidade dos patógenos em relação aos antibióticos.
Como o resultado é reportado?
Os resultados são reportados como Detectado (com a informação sobre o nível de carga bacteriana na amostra) e Não Detectado.
No caso de amostras de tanque e pool com resultado Não Detectado para todos os patógenos investigados, são ainda reportados os resultados Suspeitos, classificação dada quando o patógeno ocorre em nível abaixo do limite de segurança determinado pelo método.
Qual o valor da análise?
Valor R$ 223,00 por análise.
Link da aula aberta que o Professor falou sobre PCR
https://www.youtube.com/watch?v=FzJ_e48Ieik
Como utilizar os resultados da análise de PCR
https://www.dropbox.com/scl/fi/6jgmd5bimj3lliu80cd1i/Cartilha-Como-utilizar-os-resultados-do-PCR.pdf?rlkey=tce6ix2zkc5xxa8makkf4xn4c&dl=0
Método de controle da mastite e redução da ccs do
https://www.dropbox.com/scl/fi/tc8iop2glrcx61znhxjhv/Cartilha-Mastite-Clinica-do-Leite.pdf?rlkey=pa2jne8dug50aqrok0ep813m2&dl=0